发布日期：2024-10-30 06:35 点击次数：197
革兰氏染色（Gram Staining）是用来辩别细菌的一种样式：次样式诳骗细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分红两类hongkongdoll videos，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。这一染色样式由丹麦医师汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，领先是用来辩别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的相干，后履当作辩别细菌种类的迫切特质之一。
三上悠亚在线在我国，GB4789 系列的国标中许多致病菌的检测也齐需要进行革兰氏染色，可见其迫切性。致使不错说莫得精确掌捏革兰氏染色的微生物试验员，不会是一个及格的试验员。
革兰氏染色的旨趣
细菌细胞通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。
革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网端倪较多且交联高超，故遇酒精或丙酮祛除处理时，因失水反而使网孔松开，再加上它不含类脂，故酒精处理不会出现谬误，因此能把结晶紫与碘复合物紧紧留在壁内，使其仍呈紫色。
革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇祛除剂后，以类脂为主的外膜速即熔化，薄而松散的肽聚糖网不可违抗结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过酒精祛除后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色的法式
涂片、晾干、固定、染色、水洗、媒染、祛除、复染。
影响革兰氏染色扫尾准确性的舛错因素
1. 试剂影响
这是咱们开端应该确保的，咱们使用的试剂必须是有用的。实验室应当诞生有用的试剂处置法式，从试剂的验收到存放、使用、逾期后的拔除处理齐应有严格交替，确保咱们使用的试剂是有用的。工欲善其事必先利其器，这亦然咱们试验获胜最基础的一环。
2. 染色菌的遴荐
菌龄对革兰氏染色扫尾的影响是相配大的。
咱们染色经由中遴荐的菌应该是处于活跃滋弥远，这么的细菌活性强，生理特征显明，是以染色的扫尾准确度高，一般情况下不会出现错误。培养时代较长的革兰氏阳性菌，由于细胞老化，致使有部分菌在染色之前就仍是死亡或者自行熔化了，形成细胞壁通透性加多，就会呈现出假阴性。
以金黄色葡萄球菌为例，金葡是典型的革兰氏阳性菌，有东谈主也曾统计过培养至不同工夫的金葡的革兰氏染色扫尾，扫尾标明，在金葡活跃期的22h-26h之间，染色扫尾的准确率基本不错达到100%，而跨越26h之后，准确率就启动下落，培养至36h时，准确率能够会下落30%驾驭。
是以咱们在染色时，一定要遴荐处于活跃期、活性较强的菌落，在检测经由中一定要严格的在国标条目的时代段内进行染色试验，不可提前或者延后。
3. 涂菌的景况
在染色领先的涂布中，在挑取菌体后应该在无菌水上涂成薄薄的菌膜。而在涂布经由中，如若菌体堆积，也会极大影响染色扫尾的准确性。菌落堆积过多，继续菌体之间变得毫无谬误，而其细胞壁的因素影响形成了祛除的情况欠安，容易产生假阳性的扫尾。
同期，在初染、媒染及复染的经由中，应将染液障翳悉数这个词菌膜，幸免一部分菌染色而另一部分菌莫得染色。因此在涂片经由一定要将菌膜涂得少而均匀，这么才调达到最好服从。
4. 媒染时代
媒染时代对革兰氏阴性菌的染色扫尾有很大影响。
由于媒染时代过长，结晶紫在碘液万古期作用下过分沉稳兼并在菌体细胞壁上，影响了酒精的祛除服从，从而会导致这种假阳性的服从。
以典型的革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌为例，有东谈主作念过统计，媒染时代严格甘休在40s-60s之内，染色扫尾准确率基本可达到100%，而跨越60s准确率会有一定的镌汰，若媒染跨越100s，准确率致使可镌汰接近20%驾驭。因此在媒染经由中一定要珍贵媒染时代，甘休在50-60s为宜。
5. 酒精祛除
酒精祛除亦然一个对扫尾影响较大的操作经由。
革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌最主要的互异是细胞壁肽聚糖层厚度和结构，革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层很薄，脂多糖含量高因此在酒精祛除时，细菌细胞壁的多糖因素会被酒精熔化，增大了细胞壁的通透性，结晶紫及碘复合物就很快被酒精洗脱，之后就会被沙黄复染呈红色；而阳性菌肽聚糖层厚，脂多糖少，酒精只可起到脱水服从而无法过问，这么结晶紫和复合物就无法洗脱出来使细胞呈紫色。
因此，酒精祛除时代短，祛除服从欠安，会导致阴性菌菌体内的结晶紫和复合物不可有用的一起洗脱出来，就会出现显明的错误，使阴性菌出现假阳性。而洗脱时代过长，也会导致阳性菌的细胞壁被酒精莽撞，导致细胞内的紫色被洗脱，呈现假阴性。因此洗脱时代亦然革兰氏染色的舛错枢纽。洗脱时代应当严格甘休在20s-30s之间，同期保证洗脱服从。
小 结
在悉数这个词革兰氏染色经由中，在保证试剂有用的前提下，需要严格甘休的几个方面：染色菌必须是在其活跃期内，涂布景况不可太厚，媒染时代严格甘休在50s~60s之间，祛除时代严格甘休在20s~30s。把捏以上的舛错甘休点，革兰氏染色基本就不会出现问题啦！
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